产品信息
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产品名称 |
产品编号 |
规格 |
储存 |
价格 |
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Live & Dead Bacterial Staining Kit 活细菌/死细菌染色试剂盒 |
40274ES60 |
100 T |
4℃避光保存 |
3683.00 |
产品描述
试剂盒内含两种荧光染料DMAO和EthD-III，可分别将活细菌和死细菌染上绿色和红色。其中DMAO是一种绿色核酸荧光染料，可染色活细菌和死细菌。EthD-III是一种红色核酸荧光染料，仅染色细胞膜受损的死细菌。将DMAO和EthD-III混合使用染色时具有完整细胞膜的细菌呈现绿色，而具有受损细胞膜的细菌呈现绿色和红色。结果可以通过荧光显微镜或流式细胞仪来分析，适用于大多数细菌类型。
细菌活力的常见标准是细菌在合适的营养培养基中繁殖的能力，称为生长测定。该试剂盒通常与在液体或固体培养基中的生长测定结果有着很好的一致性。在某些条件下，膜损伤的细菌可能会在营养培养基中恢复并繁殖，而这种细菌在该测定中可能会被认为死亡。相反，一些具有完整膜的细菌可能无法在营养培养基中繁殖，但这些细菌在该测定中可能被认为是活的。因此，如果发现该检测和细菌生长测定之间有相当大的差异，应该考虑上述的可能性。
光谱特性DMAO：Ex/Em=503/530nm（withNDA）； EthD-III：Ex/Em=530/620nm（withNDA）
产品组分
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编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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40274ES60（100T） |
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40274-A |
2 vials (100 μL each) |
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40274-B |
EthD-III |
2 vials (150 μL each) |
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。储存于 4ºC，至少可以储存6个月。
注意事项
操作时请采取防护措施，穿防护服、戴一次性手套等。
使用方法
活、死细菌样品对照制备
1. 在液体培养基中培养4 mL的细菌至晚期对数期。
2. 在EP管中准备两份1mL的细菌液，并在5,000-10,000g条件下离心10-15 min。
3. 去除上清液，在其中一支EP管中加入0.3mL的0.85% NaCl重悬细菌，在另一管中加入1 mL的0.85% NaCl重悬细菌。
4. 在含有0.3 mL的0.85% NaCl的管中加入0.7 mL异丙醇，充分混合（最终浓度为70% 的异丙醇）用以制备死细菌样品。
5. 将两种样品在室温下孵育1 h，每15 min混合一次。
6. 两种样品在5,000-10,000g条件下离心10-15 min。
7. 去除上清，在两种样品中加入1 mL的0.85% NaCl重悬细菌，并如步骤6再次离心。
8. 使用分光光度计测定两种菌悬液在670 nm处的吸光值（OD670）。
9. 将两种菌悬液（活的和死亡的）密度调整到108个细菌/ mL（OD670≈0.3），然后用0.85% 的NaCl以1：100稀释，使最终密度为106个细菌/ mL。
10. 如下所示混合两种菌悬液以获得所需的活细胞：死细胞比率。
表1. 活、死菌悬液按一定体积混合以达到所需的活细胞、死细胞比例
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活细胞：死细胞 |
活菌悬液体积 (mL) |
死菌悬液体积(mL) |
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0:100 |
0 |
1.0 |
|
10:90 |
0.1 |
0.9 |
|
20:80 |
0.2 |
0.8 |
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30:70 |
0.3 |
0.7 |
|
40:60 |
0.4 |
0.6 |
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50:50 |
0.5 |
0.5 |
|
60:40 |
0.6 |
0.4 |
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70:30 |
0.7 |
0.3 |
|
80:20 |
0.8 |
0.2 |
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