肿瘤发生发展是一个复杂的多阶段过程，涉及基因表达重编程、信号通路失衡、微环境重塑等多重机制。蛋白质组学技术为揭示这些过程提供了系统化工具，但如何实现不同状态下的蛋白定量比较，依然是肿瘤蛋白质组学研究的核心难题之一。在这一背景下，多重SILAC标记（Multi-plexed SILAC）技术应运而生。作为SILAC策略的升级版本，它不仅保留了高准确性、低误差的优势，还可同时比较3个或更多条件下的样本，广泛应用于癌症亚型比较、药物作用机制研究以及时间序列动态蛋白质组分析中。

一、什么是多重SILAC标记？

SILAC使用“轻/重”标记对两组细胞进行氨基酸替代，从而在质谱中区分样本来源。而多重SILAC通常引入“中等重量”标记，实现三组样本的并行定量分析：

这一策略可在一次质谱运行中同时比较多个条件样本，大幅提高实验效率，降低批次效应。

二、多重SILAC标记在肿瘤蛋白质组学研究中的应用

1、肿瘤亚型蛋白表达谱比较

多重SILAC在肿瘤亚型差异分析中表现出色。例如，研究者将HER2阳性、三阴性和Luminal A型乳腺癌细胞分别标记为Heavy、Medium、Light组，通过定量质谱揭示了HER2通路激活相关蛋白（如ERBB2、GRB7）的表达显著升高，同时发现若干潜在亚型特异标志物。这种策略避免了三组样本分批上机所带来的系统误差，使结果更具可比性和可信度。

2、药物作用机制解析与抗药性机制研究

在靶向治疗和耐药机制研究中，多重SILAC可用于动态追踪药物处理前后的蛋白变化。例如在EGFR抑制剂研究中，将未处理、短期处理和长期耐药的肺癌细胞分别进行三通道SILAC标记，可系统识别早期响应蛋白与后期代偿机制相关蛋白，为抗药性机制提供分子线索。

3、动态蛋白质组与时序变化监测

多重SILAC也适用于时间序列研究设计。例如观察肿瘤细胞在低氧应激下不同时间点（0h、6h、24h）蛋白表达变化，可构建动态蛋白调控模型，揭示HIF通路的逐级响应机制。

三、Super-SILAC：组织样本研究的新突破

SILAC多用于细胞培养体系，但在临床肿瘤组织中，由于无法体内标记，Super-SILAC（超级SILAC）策略应运而生：Super-SILAC 通过将多个SILAC标记细胞系混合作为“重标记内参池”，与非标记肿瘤组织蛋白共混并进行质谱分析，从而实现组织样本的间接定量比较。该策略已被成功用于：

* 大规模肝癌组织蛋白质组定量；

• 肺癌患者个体化蛋白指纹图谱构建；
• 预测免疫治疗响应相关蛋白靶标筛选。

Super-SILAC的关键在于构建代表性强、表达谱覆盖广的细胞系标记库，这是影响数据质量的决定性因素之一。

四、多重SILAC标记相较TMT/iTRAQ的技术优势与局限

多重SILAC虽通量有限，但在肿瘤蛋白质组学研究中，以其生理相关性强、数据一致性好而广受欢迎。对于临床样本的高通量研究，建议多SILAC与TMT策略互为补充。

百泰派克生物科技针对多重SILAC标记与Super-SILAC实验需求，提供一站式解决方案：标记氨基酸优化体系与细胞系适配咨询；高通量SILAC标记效率验证与样本QC；结合Orbitrap Exploris 480与自研分析流程，实现高灵敏度、低背景的蛋白定量；提供Super-SILAC内参库构建与多样本组织蛋白定量服务；可视化报告支持差异分析、通路富集与标志物筛选。我们已为多个高校PI与药企客户完成多组学协同项目，包括乳腺癌耐药机制分析、肝癌异质性特征刻画、肺癌标志物筛选等。

多重SILAC标记及其变体Super-SILAC正在成为肿瘤蛋白质组学研究不可或缺的工具。其高准确性、良好的样本间可比性和丰富的扩展能力，使其在机制解析、临床转化及新靶点发现中持续发挥作用。百泰派克生物科技将持续深耕SILAC标记及定量质谱平台，助力更多科研团队开展精准、系统的肿瘤蛋白质组学研究。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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