乳酰化（Lysine Lactylation, Kla）是近年来发现的重要翻译后修饰之一，已被证实在基因表达调控、免疫代谢、肿瘤生物学等领域发挥关键作用。然而，作为一种低丰度、难检测的酰基化修饰，乳酰化研究对实验技术提出了更高要求。如何从海量蛋白质中精准捕获乳酰化位点？如何实现高通量、高分辨率的定性与定量？本文将系统梳理乳酰化蛋白质组学的全流程，从样本制备、修饰富集到质谱鉴定，帮助科研人员快速构建稳健的实验方案。

一、乳酰化蛋白质组学样本制备

乳酰化分析的首要前提是制备高质量、可重复的蛋白样本。一般流程包括：

1、样本来源选择

乳酰化广泛存在于哺乳动物细胞、组织及病理样本中。常见处理方式包括细胞裂解、组织匀浆、蛋白抽提。

2、蛋白定量与质量评估

蛋白浓度建议 >2 mg/mL，且蛋白完整性需经SDS-PAGE或Coomassie蓝染色验证。避免蛋白降解或修饰丢失。

3、胰蛋白酶酶解

采用FASP或S-Trap等高效酶解方法将蛋白裂解为肽段，并脱除可能干扰修饰富集的杂质（如盐、脂类等）。

二、乳酰化蛋白质组学肽段富集

乳酰化肽段在复杂样本中丰度极低，通常需通过特异性抗体富集手段进行前处理。

1、Kla特异性抗体选择

市面上已有商业化的抗乳酰化抗体，可特异识别Kla修饰肽段。抗体质量直接影响富集效率与特异性。

2、富集流程

固定化抗体（磁珠或琼脂糖载体）与肽段孵育，结合乳酰化肽

（1）洗涤步骤去除非特异性结合

（2）使用低pH洗脱液回收目标肽段

（3）真空干燥、复溶用于质谱上机分析

富集效率决定下游检测的深度与可靠性，建议在富集前进行一次总肽段质谱检测作对照。

三、质谱分析

1、LC-MS/MS检测策略

（1）设备推荐：Orbitrap Exploris 480, Q Exactive HF-X 等高分辨率仪器

（2）采集模式：DDA（Data Dependent Acquisition）用于修饰位点发现，DIA（Data Independent Acquisition）用于全局定量

（3）分辨率要求：MS1 ≥ 60,000；MS2 ≥ 15,000 以上，确保识别低丰度修饰

2、鉴定参数设置

（1）搜索数据库需添加乳酰化（+72.021 Da）作为可变修饰

（2）开启site localization算法（如ptmRS、Ascore）确保位点置信度

（3）建议使用Percolator等算法进行假阳性控制（FDR < 1%）

四、数据分析：构建乳酰化蛋白的功能图谱

1、鉴定统计

• 乳酰化肽段数、蛋白数、修饰位点数
• 位点分布特征（N端富集、结构域分布等）
• Motif分析：识别乳酰化倾向性序列

2、功能注释

• GO富集分析：参与的生物过程、分子功能、细胞组分
• KEGG通路分析：关联的信号通路与代谢网络
• 蛋白互作网络（PPI）：乳酰化蛋白在调控网络中的地位

3、修饰定量（可选）

若实验设计包含不同处理组（如高糖 vs 正常糖），可通过标签定量（TMT/iTRAQ）或DIA无标定量，识别差异乳酰化蛋白。

四、百泰派克生物科技的解决方案与优势

作为专业的多组学服务提供商，百泰派克生物科技在乳酰化蛋白质组学领域提供一站式定制化分析服务：

无论您是探索乳酰化在疾病机制中的作用，还是挖掘其潜在药靶，我们都能为您提供从实验到解读的全流程支持。

乳酰化蛋白质组学是深入理解代谢-表观遗传调控网络的重要手段。从高效富集到高精度鉴定，再到系统级的功能挖掘，每一环节都需要专业技术与科学策略的协同。百泰派克生物科技将持续投入于翻译后修饰组学平台的优化，助力广大科研人员深入解码乳酰化的生物学意义，推动其在基础研究与临床转化中的应用落地。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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